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- 英文名称:Foline-phenol;Folin & Ciocalteu’s phenol reagent
其他名称:福淋酚;酚试剂
浓度:1.0 Normal
原理:磷钼酸和磷钨酸在碱性条件下易被酚类化合物还原而呈蓝色反应,蛋白质中含有带酚基的酪氨酸故有此反应。Folin-酚法灵敏度是双缩脲法的100倍
性状:黄色或黄绿色液体
用途:科研、实验。suitable for determination of total protein by Lowry method
保存:阴凉密封避光 。- 产品性质:本试剂采用钨酸钠、钼酸钠、磷酸、浓盐酸按一定比例加热回流后加入硫酸锂精制而 成,色泽金黄,是实验室测定溶液中蛋白质、多肽、多酚或酪氨酸等物质含量的常用试剂。本品酸度为 1N, 请根据实验需要直接使用或适当稀释。
本试剂可测定蛋白浓度 0.05~1mg/mL,当蛋白浓度范围为 0.05~0.5mg/mL 时,线性关系最好。
※ 如果待测样品蛋白浓度超过此范围,请适当稀释到合适浓度范围。
� 应做准备工作(以蛋白含量测定为例)
1、配制 A1:称取 20g 无水碳酸钠、4g 氢氧化钠溶解于 1L 水中;
2、配制 A2:称取 0.2g 硫酸铜溶于 20mL 水中;
3、配制 A3:称取 0.4g 酒石酸钾钠溶于 20mL 水中。
在测定的当天将 A1:A2:A3 按 100:1:1 的体积比混合,即为试剂 A,混合放置 30min.后使用。
※ 先将 A2 和 A3 混合,混合液再与 A1 混合,次序颠倒可能有沉淀产生。混合液只能当天使用,三种溶
液分开于室温下可长期保存。
� 操作步骤(以蛋白含量测定为例)
1、试管中加入蛋白质样品 0.1 mL;
※注意设置空白对照,即取 0.1mL 生理盐水或蒸馏水,以下步骤按同样方法操作。
2、各管加入试剂 A 5 mL;
3、混匀后室温放置 10 分钟;
4、各管加入试剂 B 0.5 mL(即福林酚试剂,直接使用,不用稀释!);
※各管加入试剂 B 时 ,每加一管必须立即混匀(切勿等所有试管加完试剂 B 后 再 逐 个 混 匀 !),室 温 放 置 30
分钟。
5、在 750nm 波长光下,以空白对照管调零,测定蛋白样品组的光吸收度(OD 值 )。
6、根据标准曲线,计算出待测样品的蛋白浓度。
� 标准曲线的制作(以蛋白含量测定为例)
精确称取牛血清白蛋白(BSA)溶解于生理盐水中,终浓度为 2mg/mL 作为母液。
按下表配制各种标准溶液:
标 1 标 2 标 3 标 4 标 5 标 6
各标准品浓度(mg/mL) 0.05 0.1 0.2 0.2857 0.4 0.5
取母液体积(μL) 20 40 80 150 200 200
补加生理盐水/蒸馏水体积(μL) 780 760 720 900 800 600
各标准品蛋白溶液按上述 “操作步骤”操作(注意设置空白对照),先测定出各标准品的光吸收度, 再利用所得数据制作标准曲线。